利用發(fā)酵，收集酵母菌體，用去離子水清洗三次，然后用含有不同金屬離子和凍干保護(hù)劑的磷酸鹽緩沖液重懸(50 mmol/L，pH 8.0)，在經(jīng)過(guò)預(yù)處理后，通過(guò)凍干機(jī)真空冷凍干燥可得到展示 RML 的畢赤酵母全細(xì)胞粉。

    凍干機(jī)真空冷凍干燥前在菌懸液中添加一些保護(hù)劑，如山梨醇、蔗糖、果糖、海藻糖、葡萄糖、聚乙二醇、甘油等，能提高其活性和穩(wěn)定性。這些物質(zhì)在凍干過(guò)程中其羥基可與蛋白質(zhì)中的極性基團(tuán)形成氫鍵，代替蛋白質(zhì)極性基團(tuán)周圍的水分子，使蛋白質(zhì)表面形成一層假定的水化膜，保護(hù)氫鍵的連接位置不直接暴露在周圍環(huán)境中，穩(wěn)定蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)，防止其因凍干而變性。

    因此而知海藻糖、果糖和山梨醇等物質(zhì)在凍干過(guò)程中能減少酶蛋白的變性，從而提高該酶的合成活力。與未處理的全細(xì)胞酶粉相比，凍干中加入這三種物質(zhì)后，合成活力分別提高 17%、20.29%和 20.72%。

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